Teste de citotoxicidade
O teste de citotoxicidade verifica em laboratório se uma substância danifica ou mata células vivas em cultura. Um resultado aprovado apenas descarta dano celular agudo sob essas condições de teste, não a segurança, pureza, esterilidade ou identidade do produto.
Também chamado de: cytotoxicity testing
O teste de citotoxicidade é um ensaio in vitro com culturas de células que expõe células de mamíferos cultivadas a uma substância teste ou seu extrato e compara a sobrevivência celular com controles não tratados, servindo como uma triagem precoce sensível e de baixo custo para contaminantes nocivos, em vez de uma prova de segurança. Ele pode detectar contaminantes - incluindo solventes residuais, metais pesados, plastificantes, agentes de limpeza ou subprodutos de síntese - mesmo quando os ensaios químicos não mostram problema.
Procedimento do teste de citotoxicidade e o limite de 70% da ISO 10993-5
O teste de citotoxicidade é realizado expondo células de mamíferos cultivadas - comumente fibroblastos de camundongo L929 ou linhagens de hepatoma humano como HepG2 - a uma substância teste e comparando a sobrevivência com controles não tratados; de acordo com a ISO 10993-5, a viabilidade igual ou superior a 70% do controle é classificada como não citotóxica. A saúde celular é avaliada em três áreas: morfologia (estrutura física), crescimento e metabolismo.
Métodos validados comuns no teste de citotoxicidade e o que cada um mede:
- MTT/XTT: medem a atividade metabólica
- Captura de Vermelho Neutro: mede a função lisossomal
- Liberação de LDH: mede danos à membrana
- Pontuação qualitativa por microscopia
Limitações do teste de citotoxicidade e confusões comuns sobre o teste
O teste de citotoxicidade é um teste de triagem com limitações claras: ele não pode confirmar identidade ou pureza, não pode detectar toxicidade crônica ou específica de órgãos e não pode capturar todos os contaminantes. Ele é distinto do teste de esterilidade, do teste de endotoxinas ou pirogênios e do teste de genotoxicidade. Ao revisar um relatório de citotoxicidade, verifique a linhagem celular utilizada, o método aplicado, a porcentagem de viabilidade e se o limite de 70% da ISO 10993-5 foi atingido.