Pruebas de citotoxicidad
La prueba de citotoxicidad verifica en el laboratorio si una sustancia daña o mata células vivas en cultivo. Un resultado aprobatorio solo descarta daño celular agudo bajo esas condiciones de prueba, no la seguridad, pureza, esterilidad o identidad del producto.
También llamado: cytotoxicity testing
Las pruebas de citotoxicidad son un ensayo in vitro con cultivos celulares que expone células de mamífero cultivadas a una sustancia de prueba o su extracto y compara la supervivencia celular con controles no tratados. Funcionan como una herramienta de detección temprana sensible y de bajo costo para identificar contaminantes dañinos, más que como una prueba definitiva de seguridad. Pueden detectar contaminantes -incluyendo disolventes residuales, metales pesados, plastificantes, agentes de limpieza o subproductos de síntesis- incluso cuando los análisis químicos no muestran problemas.
Procedimiento de las pruebas de citotoxicidad y el umbral del 70 % según ISO 10993-5
Las pruebas de citotoxicidad se realizan exponiendo células de mamífero cultivadas -comúnmente fibroblastos de ratón L929 o líneas de hepatoma humano como HepG2- a una sustancia de prueba y comparando la supervivencia con controles no tratados; según la norma ISO 10993-5, una viabilidad igual o superior al 70 % del control se clasifica como no citotóxica. La salud celular se evalúa en tres áreas: morfología (estructura física), crecimiento y metabolismo.
Métodos validados comunes en las pruebas de citotoxicidad y lo que mide cada uno:
- MTT/XTT: miden la actividad metabólica
- Captación de rojo neutro: mide la función lisosomal
- Liberación de LDH: mide el daño a la membrana
- Puntuación cualitativa por microscopía
Limitaciones de las pruebas de citotoxicidad y confusiones comunes
Las pruebas de citotoxicidad son una prueba de detección con limitaciones claras: no pueden confirmar la identidad ni la pureza, no detectan toxicidad crónica o específica de un órgano, y no capturan todos los contaminantes. Se distinguen de las pruebas de esterilidad, las pruebas de endotoxinas o pirógenos y las pruebas de genotoxicidad. Al revisar un informe de citotoxicidad, verifica la línea celular utilizada, el método aplicado, el porcentaje de viabilidad y si se alcanzó el umbral del 70 % de la norma ISO 10993-5.