Bildgebende kapillare isoelektrische Fokussierung - Glossar

icIEF (imaged capillary isoelectric focusing) ist ein bildgebendes Verfahren zur Trennung von Proteinen und Peptiden nach ihrem isoelektrischen Punkt (pI). Der pI beschreibt den pH-Wert, bei dem die elektrische Ladung eines Moleküls neutral ist. In einer Glaskapillare wandern die Moleküle entlang eines pH-Gradienten, bis sie ihre spezifische Position erreichen. Da icIEF die gesamte Kapillare gleichzeitig erfasst (Ganzsäulendetektion), liefert sie schnellere und präzisere Ergebnisse als herkömmliche Einpunktmethoden.

icIEF analysiert die Ladungsheterogenität zur Qualitätskontrolle

Die icIEF misst die Ladungsheterogenität, um die Reinheit und Identität eines Peptids zu bestimmen. Ein reiner Wirkstoff erzeugt dabei einen einzelnen, scharfen Peak am erwarteten pI-Wert. Treten zusätzliche saure oder basische Peaks auf, deutet dies auf chemische Veränderungen wie Oxidation oder Deamidierung hin, die durch Abbau oder Fehler bei der Synthese entstehen können. In Laborberichten ist diese Analyse essenziell, da Behörden wie die FDA oder Richtlinien wie ICH Q6B für biologische Produkte detaillierte Untersuchungen der Ladungsvarianten verlangen, da sich solche Abweichungen auf die Sicherheit und Wirksamkeit auswirken können.

Grenzen und häufige Missverständnisse bei icIEF

icIEF quantifiziert Ladungsvarianten, identifiziert unbekannte Peaks aber meist nicht allein.
icIEF unterscheidet sich vom Ionenaustausch (IEC), der konventionellen cIEF, der Flachgel-IEF und der Massenspektrometrie.

icIEF analysiert die Ladungsheterogenität zur Qualitätskontrolle

Grenzen und häufige Missverständnisse bei icIEF

Quellen