icIEF

icIEF (imaged capillary isoelectric focusing, o enfoque isoeléctrico capilar por imagen) es un método de separación analítico que separa proteínas y péptidos según su punto isoeléctrico (pI), el pH en el cual la carga total de una molécula es neutra. La muestra se mezcla con anfolitos en un capilar delgado de vidrio. Un campo eléctrico genera un gradiente de pH y las moléculas se desplazan hacia su propio pI. El componente de imagen (imaged) implica detección en toda la columna: el capilar completo se escanea de una sola vez, lo que confiere mayor rapidez y cuantificación en comparación con la detección de punto único más antigua.

icIEF mide la heterogeneidad de carga en proteínas y péptidos

icIEF mide la heterogeneidad de carga, es decir, la mezcla de variantes de carga en una muestra. Un péptido puro debería mostrar un pico agudo en su pI esperado, lo que respalda la confirmación de identidad. Cambios químicos como la oxidación o la desamidación pueden desplazar el perfil y generar picos ácidos o básicos adicionales. Estos picos pueden indicar impurezas o degradación.

Esto es relevante en informes de laboratorio y controles de calidad de tipo regulatorio, ya que organismos como la FDA y la guía ICH Q6B exigen el análisis de variantes de carga para productos biológicos. Las variantes inesperadas pueden señalar degradación o síntesis inadecuada, con posibles efectos sobre la potencia, estabilidad o seguridad.

icIEF tiene limitaciones y a menudo se confunde con métodos relacionados

• icIEF separa y cuantifica variantes de carga, pero por lo general no puede identificar un pico desconocido por sí solo. Se necesitan métodos complementarios, a menudo espectrometría de masas.
• IEC (cromatografía de intercambio iónico) también mide variantes de carga, pero utiliza una columna con solvente líquido en lugar de un campo eléctrico en un capilar.
• La cIEF convencional utiliza detección de punto único más lenta y carece de la ventaja de imagen de columna completa de icIEF.
• La IEF en gel de placa es el predecesor manual, más antiguo y basado en gel de las técnicas capilares modernas.
• La espectrometría de masas mide la masa molecular en lugar de la carga eléctrica, por lo que complementa a icIEF en lugar de reemplazarlo.