HPLC - Glossar - peptidetesting.cc

HPLC (High-Performance Liquid Chromatography) ist ein chemisches Analyseverfahren, das Moleküle in einer flüssigen Probe aufgrund ihrer chemischen Eigenschaften voneinander trennt. Das Ergebnis wird als Chromatogramm dargestellt und ist ein zentraler Bestandteil von Laborberichten zur Bestimmung der Probenzusammensetzung.

Funktionsweise der HPLC-Analyse im Labor

Bei der HPLC wird ein flüssiges Lösungsmittel unter sehr hohem Druck durch eine Trennsäule gepumpt. Dieses Metallrohr ist mit festem Material gefüllt, an dem die Bestandteile der injizierten Probe unterschiedlich stark haften. Manche bewegen sich dadurch langsamer, andere schneller durch die Säule.

Am Säulenende erfasst ein Detektor jeden austretenden Bestandteil. Die Messwerte erscheinen als Chromatogramm. Weil Stoffe zu unterschiedlichen Zeiten austreten, zeigt es, welche Komponenten in der Flüssigkeit enthalten sind.

Das Chromatogramm wird in Laborberichten vor allem für zwei Zwecke genutzt:

Identitätsprüfung: Die Durchlaufzeit eines Stoffs wird mit einem bekannten Standard verglichen, um die Substanz zu bestätigen.
Reinheitsmessung: Die Menge der Zielverbindung wird mit Verunreinigungen verglichen. Das Ergebnis wird meist in Flächenprozent angegeben, zum Beispiel 98 % rein, und zeigt Nebenprodukte oder Abbauprodukte.

Unterschiede zwischen HPLC und Massenspektrometrie

In Laborberichten werden HPLC und Massenspektrometrie (MS) oft verwechselt. HPLC trennt Bestandteile und unterstützt vor allem die Reinheitsbewertung, also die Frage, wie viel Zielverbindung im Vergleich zu Verunreinigungen vorhanden ist. MS bestimmt dagegen das Molekulargewicht und hilft, die chemische Identität zu bestätigen.

Häufig werden beide Methoden als LC-MS kombiniert. Das ist wichtig, weil HPLC allein verborgene Verunreinigungen übersehen kann. Die Kopplung mit MS erhöht daher die Sicherheit, dass Reinheit und Identität der Probe korrekt erfasst werden.

Funktionsweise der HPLC-Analyse im Labor

Unterschiede zwischen HPLC und Massenspektrometrie

Quellen