Chromatographie - Glossar - peptidetesting.cc

Chromatographie ist ein physikalisches Verfahren zur Trennung von Stoffgemischen in ihre Einzelbestandteile. In der Peptidanalytik dient sie als zentrale Methode zur Reinheitsbestimmung: Die getrennten Komponenten werden als Peaks in einem Chromatogramm dargestellt. Durch die Auswertung der Peak-Flächen lässt sich der relative Reinheitsgrad der untersuchten Probe präzise bestimmen.

Funktionsweise der Chromatographie bei Peptidtests

Das Trennprinzip basiert darauf, dass eine flüssige mobile Phase durch eine Säule mit einer festen stationären Phase geleitet wird. Da die Bestandteile des Gemischs unterschiedlich stark von diesen Phasen angezogen werden, wandern sie mit verschiedener Geschwindigkeit und verlassen die Säule zeitlich versetzt.

In der Peptidprüfung wird meist die Hochleistungsflüssigkeitschromatographie (HPLC) eingesetzt, die Moleküle anhand ihrer wasserabweisenden Eigenschaften trennt. Das Ergebnis ist ein Chromatogramm, in dem jeder Bestandteil einen Peak erzeugt. Die Reinheit wird berechnet, indem die Fläche des Hauptpeaks der Zielsubstanz ins Verhältnis zu allen anderen Peaks gesetzt wird. Hinweise auf die Identität der Substanz ergeben sich nur indirekt durch den Abgleich der Peak-Zeitpunkte mit einem Referenzstandard.

Einschränkungen bei der Interpretation von Chromatogrammen

Chromatographie ist nicht mit der Massenspektrometrie (MS) gleichzusetzen: HPLC trennt Gemische in Bestandteile, während MS die exakte Molekülstruktur identifiziert.
Ein einzelner Peak im HPLC-Bericht stützt die Reinheitsaussage, belegt aber für sich allein nicht die Identität der untersuchten Substanz.
Ein hoher Reinheitsprozentsatz garantiert keine vollständige Sicherheit, da Standard-HPLC bakterielle Endotoxine, Lösungsmittelrückstände und Schwermetalle nicht nachweist - hierfür sind separate Testmethoden erforderlich.

Funktionsweise der Chromatographie bei Peptidtests

Einschränkungen bei der Interpretation von Chromatogrammen

Quellen