Pureza do peptídeo

A pureza do peptídeo é a porcentagem do peptídeo alvo correto em relação a impurezas semelhantes a peptídeos, como sequências truncadas ou desprotegidas de forma incompleta. A pureza por HPLC é uma razão calculada a partir de picos relacionados ao peptídeo em um cromatograma, não a massa total ou o conteúdo geral de peptídeo da amostra.

HPLC é o método padrão para calcular a pureza do peptídeo

A Cromatografia Líquida de Alta Eficiência em fase reversa (HPLC) separa moléculas por hidrofobicidade, ou seja, o quão fortemente elas interagem com a água. Uma amostra dissolvida passa por uma coluna especializada, onde o peptídeo alvo e as impurezas relacionadas saem em momentos diferentes e aparecem como picos separados em um cromatograma.

A pureza é calculada dividindo a área do pico alvo pela área total de todos os picos e, em seguida, multiplicando por 100. O resultado descreve a proporção do peptídeo desejado em relação ao material relacionado a peptídeos.

A pureza por HPLC tem limitações importantes nos testes de peptídeos

• A pureza por HPLC relata uma razão, não a quantidade absoluta de peptídeo no frasco.
• Ela não confirma a identidade molecular; um teste secundário como a Espectrometria de Massas (MS) é necessário para provar que o pico principal é a molécula pretendida.
• Contaminantes não peptídicos, como água, sais ou solventes residuais, não são medidos pelo número de pureza por HPLC.
• A pureza do peptídeo não é o mesmo que o Conteúdo Líquido de Peptídeo (NPC); uma amostra com 99% de pureza pode ainda conter massa não peptídica significativa e menos miligramas ativos do que o esperado.
• Impurezas podem influenciar os resultados da pesquisa, portanto, estudos de ligação a receptores exigem peptídeos particularmente puros.