Pureté des peptides

La pureté d'un peptide est le pourcentage du peptide cible correct par rapport aux impuretés de type peptidique, telles que les séquences tronquées ou incomplètement déprotégées. La pureté HPLC est un rapport issu des pics liés au peptide dans un chromatogramme, et non la masse totale ou la teneur globale en peptide de l'échantillon.

La HPLC est la méthode standard pour calculer la pureté d'un peptide

La chromatographie liquide à haute performance en phase inverse (HPLC) sépare les molécules en fonction de leur hydrophobicité, c'est-à-dire leur degré d'interaction avec l'eau. Un échantillon dissous traverse une colonne spécialisée, où le peptide cible et les impuretés apparentées éluent à des moments différents et apparaissent sous forme de pics distincts sur un chromatogramme.

La pureté est calculée en divisant la surface du pic cible par la surface totale de tous les pics, puis en multipliant par 100. Le résultat décrit la proportion du peptide souhaité parmi la matière liée au peptide.

La pureté HPLC présente des limites importantes dans l'analyse des peptides

• La pureté HPLC indique un rapport, et non la quantité absolue de peptide dans le flacon.
• Elle ne confirme pas l'identité moléculaire ; un test secondaire comme la spectrométrie de masse (MS) est nécessaire pour prouver que le pic principal correspond à la molécule visée.
• Les contaminants non peptidiques, tels que l'eau, les sels ou les solvants résiduels, ne sont pas mesurés par le chiffre de pureté HPLC.
• La pureté d'un peptide n'est pas équivalente à la teneur nette en peptide (NPC) ; un échantillon avec une pureté de 99 % peut encore contenir une masse non peptidique significative et moins de milligrammes actifs que prévu.
• Les impuretés peuvent influencer les résultats de recherche, c'est pourquoi les études de liaison aux récepteurs exigent des peptides particulièrement purs.